一代当红女星缪妙自下嫁前武师洪十一便息影，过着相夫教子的平凡生活，一对儿女翊岚、翊风长大后各自组织家庭。两夫妇逍遥过活，可是妙不幸患上顽疾，自知命不久已，最大心愿是“再飞一次”。奈何一当年意外受伤，轻功大不如前，正当踌躇如何带妙再飞之际，妙却不敌病魔离世。 　　有心人有意为妙举办回顾展，街坊齐心和应，更落力找回一些当年他们在电影公司工作时保存下来的旧物。一本打算放弃重练轻功，手执照片一刻却百感交集，遂打算圆亡妻遗愿，定必要“再飞一次”！ 　　与此同时，曾在电影中担当妙替身的何索突然出现，打算向一进行报复……

督察戴安娜（宣萱 饰）一直安逸于档案管理的后勤岗位，因缘际会跟元祖级陀枪师姐陈三元（滕丽名 饰）、飞虎队男神蒙汉森（陈豪 饰）合力破案后，被上司韦展超（许绍雄 饰）安排加入悬案小组，与一班各有「特色」的警员，在汉森带领下追查外界不关注的悬案。汉森不满安娜而互相斗法，直至揭露安娜因曾被胁持而恐惧用枪，反令二人擦出爱火花！安娜重遇多年前惨遭灭门的补习学生刘达华（罗子溢 饰），他却加入了黑道……在感情与内疚推动下，安娜能否拿回手枪重新振作，成就新一代的「陀枪师姐」？

香港法证部高级化验师高安（黄浩然饰）、法医科高级医生闻家希（李施嬅饰）、西九龙重案组高級督察郭辉煌（谭俊彦饰），这「灭罪铁三角」带领着精英团队，用专业的法证科学，揭示惊人的预谋策划；用精密的法医知识，破解隐蔽的人体密码；用严谨的执法精神，披露震撼的罪恶真相！热血记者徐意（汤洛雯饰），童年憾事竟与高安紧扣牵连；法证专才水慧明（陈炜饰），遭至爱背叛顿成杀人疑凶；警队精英高靖（朱晨丽饰），锲而不舍追寻亲人被诱拐真相...... 　　谜团奇案，重重交错；冷血凶徒，幕幕惊心！人在做，天在看！「灭罪铁三角」坚守「邪不胜正，恶不抵善」的信念，誓为死者发声，替生者雪冤！

肝胆情难舍，夺爱恨难平！　　董斐(陈键锋)不理亡父遗训，乘姊姊岚(盖鸣晖)不觉时偷走出自幼居住的桃花村，途中结识了渔家子常欢(吴卓羲)。斐、欢到钱塘江观潮，斐对富家女邢晓雪(曹敏莉)一见钟情。　　岚、斐意外发现父亲当年含冤而逝，为了为父讨回清白，二人在杭州住下。岚因调查而认识了佯装搭棚工人的节衡都尉狄英伟(元华)。伟义兄为沧洲五鬼所杀，伟为了方便调查而一直隐藏身分。调查下来，原来岚父之死，与沧洲五鬼及雪父均环环相扣。　　另方面，斐、欢因为雪而闹翻，斐更因利欲熏心而重创岚……

人心，是一门深奥的科学。人会犯罪作恶，皆因被贪婪、愤怒、软弱和嫉妒等情绪支配。为了逃避刑责，人会利用谎言掩饰真相，用诡计扰乱视线，令法证工作难上加难。未破的悬案、消失的证据、迷失的困局，都是法证团队面对的一个个难关。纵然过程中会受到打击，但他们都会坚持初心，跌倒之后重新出发，不会放弃追寻真相。 　　《法证先锋V》的案件和布局更加让人意想不到，唯有靠着“法证部”、“法医科”及“重案组”这灭罪铁三角，秉承前四季的理念，通力合作，找出真凶，还生者公道，替死者雪冤。